自誘導培養基背景原理

自誘導培養基Auto lnducion Medium (AIM)，包含LB Broth (AIM)，2x YT Broth (AlM), Terifc Broth (AIM)， Super Broth (AIM)。通常，外源蛋白在細營(yíng)中表達時(shí)常便用IPTG誘導的啟動(dòng)子，女Lac啟動(dòng)子。當細胞密度達到理想值時(shí)，通過(guò)向培養基中加入!PTG的方法誘導蛋白表達。使用這個(gè)自動(dòng)誘導培養基，不再需要監測細胞密度和添加PTG。葡萄糖作為半乳糖提縱子的陽(yáng)過(guò)因子陽(yáng)止細瑩利用α-乳糖，而被優(yōu)先代謝，促進(jìn)高密度生長(cháng)。一旦培養基中的葡萄糖被耗盡(通第發(fā)生在對數期的后期)，乳糖被B-半乳糖苷酶轉換成異乳糖(葡萄糖-1,6-半乳糖)，而后者作為IPTG誘導型啟動(dòng)子的誘導劑，引起乳糖阻過(guò)子從與DNA結合的位點(diǎn)上釋放，啟動(dòng)重組蛋白的表達。對于DE3基因型的E.col中，異乳糖使T7ac啟動(dòng)子去阻遏，并誘導lacUV5啟動(dòng)子表達T7 RNA聚合酶。通過(guò)這種方式，在細菌培養物生長(cháng)到某一特定點(diǎn)時(shí)蛋白表達自發(fā)開(kāi)始，省掉了監測細胞密度(OD600)和添加IPTG這兩個(gè)步騾，與傳統IPTG誘導的蛋白表達過(guò)程相比，使用自動(dòng)誘導培養基極大地方便和簡(jiǎn)化了試驗流程。

自誘導培養基(lac啟動(dòng)子)(Auto-induction Medium)產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品是在pET專(zhuān)用生長(cháng)培養基的基礎上開(kāi)發(fā)而成的,它利用E.coi自身對培養 基中碳源和能源的調控利用機制,實(shí)現外源蛋白在細菌達到飽和期后的自動(dòng)誘發(fā)。

具有下列特點(diǎn):

1.不需添加任何IPTG或相關(guān)誘導物,節約成本。

2.免去密切監控菌液密度的過(guò)程,尤其適合大規模篩選

3.細菌生長(cháng)密度遠高于IPTG誘導表達系統。

4.外源蛋白表達量遠遠高于IPTG誘導表達系統

5.本產(chǎn)品即開(kāi)即用,操作簡(jiǎn)單

6.與各種細胞培養容器兼容(如培養瓶、培養、深孔管、發(fā)酵等)。

過(guò)夜培養自動(dòng)誘導細胞表達的培養基系統，培養基都可以大程度上提高pET系列和其它IPTG原核誘導表達系統在大腸桿菌中蛋白的表達量，其的方便之處在于使用這種培養基不需要對大腸桿菌的生長(cháng)密度OD值進(jìn)行檢測。因為IPTG會(huì )對細胞存在毒性，因此使用了這種不含IPTG的自動(dòng)誘導體系培養基與傳統培養基相比可以使細胞數量和目的蛋白量都大大增加教倍。

自誘導LB培養基選購指南

Quantity: 500g

Appearance: Beige powder. Autoclaved medium should be amber.

Storage: 2oC – 25oC. When not in use, keep container closed to avoid hydration.

Preparation:
Add 34,85g of the dehydrated medium to one liter of distilled water. Mix well and dissolve by heating with regular agitation. Boil for 1 minute in order to dissolve completely. Dispense in appropriate containers and sterilize by autoclaving at 121oC for 15 to 20 minutes. Store at 2oC to 8oC.

Formulation (g/L)
Tryptone: 10,00
Yeast Extract: 5,00
MgSO4: 0,15
(NH4) 2SO4: 3,30
KH2PO4: 6,80
Na2HPO4: 7,10
Glucose 0,50
Alpha Lactose 2,00
Final pH (25oC): 7,0 ± 0,2