Lumafluor公司的逆向示蹤產(chǎn)品RetroBeads是逆向示蹤熒光微球，且也是目前證實(shí)有效的示蹤微球，見(jiàn)Nature（310: 498-500 (1984)）等頂刊。該產(chǎn)品的有效性經(jīng)數百篇從無(wú)脊椎動(dòng)物到哺乳動(dòng)物實(shí)驗的研究論文證實(shí)，這正是靶點(diǎn)科技旗下Proven and Published®服務(wù)和產(chǎn)品質(zhì)量理念的體現。RetroBeads體內注射高度集中不易擴散，信號強，對活細胞或活體無(wú)毒，且存留時(shí)間大于一年，與大多順向示蹤劑、原位雜交檢測技術(shù)、免疫組化技術(shù)兼容。

訂購信息：

產(chǎn)品貨號：R180-100

產(chǎn)品名稱(chēng)：Red Retrobeads IX Lumafluor逆向示蹤紅色熒光微粒

產(chǎn)品規格：100μL

現貨代理：靶點(diǎn)科技

英文信息：

R180 Red Retrobeads™ IX (100ul)

Highly confined injections--superb for detailed connectivity studies. Persist indefinitely (> 1 year!) in living cells, nontoxic. Compatible with most other anterograde tracers, in situ hybridization, and immunohistochemsitry.

貨號：R180

規格：100ul

品牌：Lumafluor

代理：Target Technology

激發(fā)發(fā)射譜：

Lumafluor  R180-100  Red Retrobeads IX Lumafluor逆向示蹤紅色熒光微粒

產(chǎn)品形態(tài)： 隨附的小瓶包含懸浮在蒸餾水中的濃縮珠溶液。如果紅珠用于逆行追蹤神經(jīng)元通路，則溶液可以按原樣使用或稀釋使用。在大鼠視覺(jué)皮層中，使用紅珠時(shí)，1:4 的稀釋度似乎不會(huì )降低逆行標記的質(zhì)量或程度。但是，對于初始實(shí)驗，我們強烈建議使用溶液全強度。除蒸餾水外，標準鹽溶液（NaCl、KCl）也可用作稀釋劑。所提供的綠色珠子已準備好用于逆行追蹤實(shí)驗。不建議稀釋綠色珠子。

產(chǎn)品儲存：珠溶液應儲存在加濕容器中，在冰箱中，以防止蒸發(fā)。不要凍結！被凍結的珠子將無(wú)法工作，也無(wú)法挽救。如果珠子變干，它們就不能被重組。這種材料的保質(zhì)期尚未確定，但如果儲存得當，它可以保持幾年的良好狀態(tài)。

產(chǎn)品應用：最好使用壓力注射珠子（例如 1 毫升 Hamilton 注射器或加壓空氣注射系統）。對于局部電路工作，已通過(guò)具有 30-50 um 直徑的玻璃移液器注入非常少量 (30-50 nl)。對于常規逆行追蹤，使用更大體積 (0.1-0.3 ul) 和更大直徑的移液器吸頭。然而，即使注射量很大，珠子也不會(huì )擴散到遠離注射部位的地方（通常小于 1 毫米）。因此，為了標記投射到大型結構的所有或大部分神經(jīng)元，應該進(jìn)行幾次注射。不建議將珠子的離子電滲應用作為傳遞示蹤劑的有效方法。然而，珠子確實(shí)帶有凈負電荷。

生存時(shí)間：在大多數溫血脊椎動(dòng)物系統中，注射后的最短有效生存時(shí)間約為 24 小時(shí)。標記強度隨著(zhù)存活時(shí)間的延長(cháng)而增加，最長(cháng)可達 48 小時(shí)。48 小時(shí)后，未觀(guān)察到標記強度增加（或減少）。這些值在冷血動(dòng)物中可能有很大不同，建議初始生存時(shí)間為一周。最長(cháng)存活時(shí)間尚未確定，但即使在 14 個(gè)月的存活時(shí)間后，標簽的質(zhì)量或范圍也沒(méi)有變化。單元格可能被標記。未觀(guān)察到對動(dòng)物或神經(jīng)元的毒性作用。

固定和處理：標準固定是用 0.1 M 磷酸鹽緩沖液洗滌，然后在 0.1 M 磷酸鹽緩沖液 (pH 7.4) 中加入 4% 多聚甲醛。戊二醛會(huì )產(chǎn)生大量的組織自發(fā)熒光，這可能會(huì )掩蓋珠標記的神經(jīng)元，應盡可能避免。綠色珠子在戊二醛固定材料中將看不見(jiàn)。將冷凍切片收集在磷酸鹽緩沖液中，安裝在涂有明膠的載玻片上，然后風(fēng)干。干燥后，可以將載玻片在二甲苯中清洗 1 分鐘，然后用 Fluoromount 或 Krystalon 蓋上蓋子。Fluoromount 購自 Atomergic Chemetals Corp., Farmingdale, NY；來(lái)自新澤西州吉布斯敦的 Harleco (EM Industries) 的 Krystalon。

短暫接觸酒精和二甲苯無(wú)害，但長(cháng)時(shí)間接觸（超過(guò) 5 分鐘）會(huì )破壞珠子。珠子對甘油非常敏感，如果安裝在含甘油的溶液中會(huì )迅速褪色。在需要使用非長(cháng)期性透明/固定劑的情況下，水楊酸甲酯優(yōu)于甘油。如果將載玻片保存在黑暗中，細胞中的標記至少一年不會(huì )褪色（盡管背景自發(fā)熒光可能會(huì )顯著(zhù)增加）。到目前為止，在塑料嵌入后保留珠子標記的嘗試尚未成功。

顯微觀(guān)察：紅色珠子中的染料是羅丹明，因此可以使用任何用于羅丹明的熒光濾光片。一些較舊的尼康羅丹明濾鏡組會(huì )產(chǎn)生非常高的背景，這會(huì )使標記的細胞不可見(jiàn)。使用 Zeiss 和 Leitz 標準羅丹明濾光片都獲得了良好的結果。對于綠色珠子，寬帶熒光素過(guò)濾器效果很好。路西法黃的濾光片組提供更強烈的信號，但以更高的背景為代價(jià)。窄帶熒光素濾光片會(huì )產(chǎn)生比寬帶濾光片弱得多的信號。即使經(jīng)過(guò)長(cháng)時(shí)間的觀(guān)察或顯微攝影，珠子也不會(huì )明顯褪色。

使用低功率、低數值孔徑的干式物鏡（例如 X4、X10）通?？床坏綐擞?。如果細胞被強烈標記，X10 浸沒(méi)物鏡（數值孔徑為 0.4 或更大）或更高功率的干物鏡通常會(huì )顯示細胞。然而，X25 浸沒(méi)物鏡通常會(huì )顯示非常清晰標記的細胞，而低功率物鏡會(huì )錯過(guò)這些細胞。這些警告尤其適用于綠珠。在決定實(shí)驗不起作用之前，請使用浸入物鏡檢查注射部位附近的部分。應該存在許多局部標記的細胞。

綠色微球注意事項：在迄今為止所做的工作中，似乎年輕的動(dòng)物比年長(cháng)的動(dòng)物更好地傳遞信號。此外，年輕動(dòng)物的組織自發(fā)熒光較低。因此，如果可能的話(huà)，建議在涉及綠珠的實(shí)驗中使用年輕的動(dòng)物。

因為綠色珠子在比紅色珠子更短的波長(cháng)下被激發(fā)，所以組織自發(fā)熒光是一個(gè)更大的問(wèn)題。因此，盡量減少自發(fā)熒光將產(chǎn)生更好的對比度信號。減少自發(fā)熒光的方法包括： 

1) 使用更薄的切片（例如 30 um 而不是 40 或 50）；
2) 使用較年輕的動(dòng)物；

3) 在蓋玻片后立即檢查切片（背景隨著(zhù)時(shí)間的推移而增加）。