移植后的缺血再灌注損傷 （IRI） 是由宿主中性粒細胞介導的，宿主中性粒細胞在外滲時(shí)啟動(dòng) NETosis 并誘導同種異體移植物損傷 。肺移植后，IRI 導致超過(guò) 50% 的肺受者出現原發(fā)性移植物功能障礙，這是早期死亡和慢性排斥反應的主要危險因素，以及晚期死亡。雖然中性粒細胞耗竭可以改善 IRI，但它也會(huì )損害宿主的病原體定向反應。因此，闡明中性粒細胞轉運到同種異體移植物中的機制對于開(kāi)發(fā)臨床適用的 IRI 療法至關(guān)重要。

根據細胞表面標志物，血液?jiǎn)魏思毎煞譃榉墙?jīng)典亞型和經(jīng)典亞型。經(jīng)典單核細胞的特征是細胞表面分子 Ly6C 的高表達和趨化因子受體 CCR2 的存在。它們是在循環(huán)中發(fā)現的主要單核細胞，它們在那里調查器官空間并容易對炎癥線(xiàn)索做出反應。經(jīng)典單核細胞通常被認為是“促炎性"，因為它們很容易被募集到感染性和無(wú)菌性炎癥部位，在那里它們精心構建促炎細胞因子并分化為巨噬細胞和樹(shù)突狀細胞。相比之下，非經(jīng)典單核細胞缺乏 CCR2 表達，但表達低水平的 Ly6C 和高水平的 fractalkine 受體 CX3CR1。這些細胞以 CX3CR1 依賴(lài)性方式在微血管系統中巡邏，盡管對非經(jīng)典單核細胞的發(fā)育和功能知之甚少，但最近的研究表明這種單核細胞亞型與各種炎癥過(guò)程有關(guān)。單核細胞在介導中性粒細胞遷移到受傷組織中的確切作用尚不清楚。我們最近發(fā)現，供體來(lái)源的非經(jīng)典單核細胞通過(guò)產(chǎn)生中性粒細胞趨化因子 MIP-2 是早期中性粒細胞募集所必需的，并且這些細胞的耗竭可改善肺 IRI。有趣的是，使用活體 2 光子成像，我們之前已經(jīng)觀(guān)察到循環(huán)單核細胞促進(jìn)中性粒細胞運輸到新鮮再灌注的肺中。此外，我們發(fā)現，當肺移植受者缺乏 CCR2 表達時(shí)，肺移植物功能會(huì )顯著(zhù)改善，這會(huì )損害經(jīng)典單核細胞向肺移植物的募集。由于中性粒細胞募集到組織和外滲到血管外間隙對于肺 IRI 的起始和傳播都是必要的，因此可以假設經(jīng)典單核細胞對于中性粒細胞外滲可能是需要的。因此，我們假設非經(jīng)典單核細胞和經(jīng)典單核細胞可能在 IRI 的發(fā)展中具有互補作用，其中非經(jīng)典單核細胞為白細胞募集提供初始信號，而宿主來(lái)源的經(jīng)典單核細胞對于中性粒細胞外滲到受傷的肺部至關(guān)重要。

在人肺同種異體移植物和小鼠模型中，我們發(fā)現 IRI 與經(jīng)典單核細胞和中性粒細胞募集到受傷的肺部有關(guān)。經(jīng)典單核細胞是從宿主脾臟動(dòng)員的，是中性粒細胞外滲所必需的，因為 CCR2 + 經(jīng)典單核細胞的藥理學(xué)耗竭以及脾切除術(shù)消除了中性粒細胞外滲，而初始脾切除術(shù)后的異位脾移植挽救了損傷。為了實(shí)現臨床相關(guān)性，我們在原位血管化小鼠肺移植模型中驗證了這些發(fā)現。我們發(fā)現宿主脾切除術(shù)改善了 IRI，而用脾源性經(jīng)典單核細胞重建可恢復 IRI。中性粒細胞外滲是由經(jīng)典單核細胞產(chǎn)生 MyD88 依賴(lài)性 IL-1β 介導的，這導致肺血管內皮細胞中 ZO-2 的下調，ZO-2 是一種與跨膜緊密連接蛋白相互作用的細胞質(zhì)蛋白。IL-1β 介導的 ZO-2 下調足以增加內皮通透性。因此，我們的工作揭示了我們認為以前未被認識的機制，即從脾臟動(dòng)員的經(jīng)典單核細胞促進(jìn) IRI 后募集的中性粒細胞外滲到肺部。

構建小鼠疾病模型后，對于我們需要研究的細胞群體，我們能拿到細胞群體在模型中的監測數據，比如數量動(dòng)態(tài)曲線(xiàn)，功能動(dòng)態(tài)曲線(xiàn)或者別的狀態(tài)的數據。不管是數量還是質(zhì)量的動(dòng)態(tài)監測，對我們后續建議清除劑體系，給藥時(shí)間點(diǎn)和持續時(shí)間，都有精準的指導作用。對于肺缺血再灌注模型中肺臟各種細胞群體的變化曲線(xiàn)和清除評價(jià)解決方案，可以參考這篇文獻。

論文信息：

論文題目： Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1β

期刊名稱(chēng)：J Clin Invest.

時(shí)間期卷：2018;128(7):2833–2847

在線(xiàn)時(shí)間：2018年5月21日

DOI：doi.org/10.1172/JCI98436.

Clodronate Liposomes氯膦酸鹽脂質(zhì)體產(chǎn)品信息：

貨號：CP-005-005

規格：5ml+5ml

品牌：Liposoma

產(chǎn)地：荷蘭

名稱(chēng)：Clodronate Liposomes and Control Liposomes

辦事處：Target Technology（靶點(diǎn)科技）

肺臟缺血再灌注模型中，NK細胞，肺泡巨噬細胞AM，嗜酸性粒細胞EOS，肺間質(zhì)巨噬細胞IM，型樹(shù)突狀DC細胞，非經(jīng)典單核細胞NCM數量曲線(xiàn)。

NK: NK cells; 

AM: alveolar macrophages; 

Eos:eosinophils; 

IM: interstitial macrophages; 

MoDC: monocyte-derived dendritic cells; 

NCM: non-classical monocytes; 

DC: dendritic cells

通過(guò)這個(gè)數據，我們也可以看到，荷蘭Liposoma的巨噬細胞清除劑Clodronate Lipoosoemes不會(huì )清除DC細胞。其次，對于比較巨噬細胞清除和不清除組別時(shí)，建議選擇Control試劑，就是PBS Liposomes（Control）。對于異物顆粒，Lisposomes會(huì )引起吞噬細胞的反應。當我們選擇了嚴格對照，可以降低本地，便于數據后續分析。咱們可以看這個(gè)數據，NCM在PBS-lip組相對于WT的IR組，有顯著(zhù)增加。當然，這個(gè)還需要看時(shí)間點(diǎn)。一過(guò)性的增加和能否引起進(jìn)一步反應，正是研究顆粒度的細節體現。