氯膦酸二鈉脂質(zhì)體Clodronate Liposomes是相對于抗體，基因敲除小鼠等手段而言目前來(lái)說(shuō)成熟（Nico Van Rooijen教授90年代開(kāi)發(fā)和后期荷蘭liposoma公司商業(yè)化生產(chǎn)），可靠，經(jīng)濟且廣泛使用的一種有效的巨噬細胞清除工具。脂質(zhì)體包裹氯膦酸鹽通常用于清除巨噬細胞群，因為它一旦被巨噬細胞吞噬，然后被溶酶體酶消化，游離氯膦酸鹽在細胞質(zhì)內積累，當濃度超過(guò)一定閾值時(shí)就會(huì )產(chǎn)生功能上不可逆的抑制和細胞凋亡。由于氯膦酸鹽在血液中的半衰期只有幾分鐘，游離的氯膦酸鹽會(huì )被腎臟迅速清除。借助腹腔，尾靜脈等多種給藥方式實(shí)現不同組織部位中巨噬細胞的清除。荷蘭liposoma是目前Cell，Nature和Science頂刊發(fā)表的用于體內/體外巨噬細胞清除的氯磷酸二鈉脂質(zhì)體/氯膦酸鹽脂質(zhì)體。
對于腦部巨噬細胞，可以參考我們之前的文章，有專(zhuān)門(mén)介紹腦各種類(lèi)型巨噬細胞的。常駐小膠質(zhì)細胞與血管周?chē)湍X膜巨噬細胞一起由胚胎卵黃囊前體產(chǎn)生，占所有腦細胞的10%。氯膦酸鹽脂質(zhì)體通過(guò)腦內或腦室注射給藥，主要是掌握腦立體定位注射，可以定點(diǎn)清除海馬，下丘腦等部位巨噬細胞。北京腦科學(xué)與類(lèi)腦研究所利用荷蘭liposoma的氯膦酸鹽脂質(zhì)體Clodronate Liposomes清除下丘腦巨噬細胞的文獻可以聯(lián)系我們索取。
腦巨噬細胞清除參考模型一
動(dòng)物模型：C57BL/6J小鼠，使用海馬切片培養直接研究小膠質(zhì)細胞
巨噬細胞清除方法：在體外試驗天數的第0天和第3天，在培養基中加入0.05 mg/mL Clophosome-A 培養24小時(shí)。對照組給予等量陰離子脂質(zhì)體對照加入到培養基中。處理后，切片用加熱的PBS仔細沖洗三次，并用新鮮培養基培養。
巨噬細胞清除結果：
在氯膦酸處理的培養物中，小膠質(zhì)細胞被顯著(zhù)去除(圖A, 3)，而氯膦酸鈉對神經(jīng)元密度無(wú)影響
腦巨噬細胞清除參考模型二
動(dòng)物模型：C57BL/6J小鼠
巨噬細胞清除方法：立體定位注射10ul
巨噬細胞清除結果：
腦室內的氯膦酸鈉導致血管周?chē)鶦D206陽(yáng)性巨噬細胞的清除，但不影響小膠質(zhì)細胞(P2Y12R標記，綠色)。用內皮標記物番茄凝集素(藍色)觀(guān)察血管。
腦巨噬細胞清除參考模型三
動(dòng)物模型：C57BL/6雄性小鼠(8 ~ 10周齡，23 ~ 25 g)；C57BL/6背景Cx3cr1GFP/+小鼠(雄性，8 ~ 10周齡，23-25 g)
巨噬細胞清除方法：
Cx3cr1GFP/+小鼠和C57BL/6小鼠，將1 μL的Liposomes 或1 μL的對照Dil-Lip注射到左紋狀體(距囟門(mén)前方0.8毫米，外側2.0毫米，深度為3.0毫米)
巨噬細胞清除結果：
A.
注射Clodronate liposomes于24小時(shí)開(kāi)始在腦實(shí)質(zhì)中消耗小膠質(zhì)細胞，注射1 μL Dil-Lip后第1天的一系列腦切片（脂質(zhì)體用紅色熒光染料Dil標記）進(jìn)入紋狀體（圖A第一排）或腦側室（圖A第二排）
代表性圖像顯示，紋狀體注射 Dil-Lip或Clodronate liposomes后不同時(shí)間點(diǎn)Cx3cr1-GFP+小膠質(zhì)細胞（綠色）的耗竭。（圖A第三、四排）顯示放大后的小膠質(zhì)細胞圖像。
B.
注射1 μL Clodronate liposomes后紋狀體Cx3cr1-GFP+細胞的量化數據（圖B）。
C.
在Clodronate liposomes注射后的第1、4、7天，用流式細胞術(shù)分析Cx3cr1-GFP+小膠質(zhì)細胞。圖中顯示了代表性的點(diǎn)圖，并顯示了紋狀體細胞群中Cx3cr1-GFP+的百分比。紅色：Cx3cr1-GFP?細胞群；綠色：Cx3cr1-GFP+細胞群（圖C）。
D.
圖表顯示注射Clodronate liposomes后紋狀體和皮層中剩余Cx3cr1-GFP+種群的百分比（圖D）。
腦巨噬細胞清除參考模型四
巨噬細胞清除方法：海馬切片培養中加入氯膦酸脂質(zhì)體體外18天，濃度0.5 mg/mL（氯膦酸共500 µg），24小時(shí)后，用培養基輕輕洗滌培養物，并給予另一劑量的0.5 mg/mL氯膦酸脂質(zhì)體，再孵育24小時(shí)，此時(shí)再次洗滌培養物，置于新培養基中，孵育7天。第7天，培養的小膠質(zhì)細胞耗盡，準備進(jìn)行后續實(shí)驗。
巨噬細胞清除結果：
小膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞、少突膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元的代表性細胞特異性標記染色（Iba1，
GFAP, CNPase和NeuN）分別顯示與對照組（第一排）相比氯膦酸脂質(zhì)體處理（第二排）的切片小膠質(zhì)細胞耗竭，且對其他細胞類(lèi)型沒(méi)有影響（比例尺，20毫米）。
靶點(diǎn)科技（北京）有限公司
地址：中關(guān)村生命科學(xué)園北清創(chuàng )意園2-4樓2層
© 2025 版權所有：靶點(diǎn)科技（北京）有限公司 備案號：京ICP備18027329號-2 總訪(fǎng)問(wèn)量：330433 站點(diǎn)地圖 技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 管理登陸
